1.脉络舒通丸治疗精索静脉曲张相关男性不育的潜在成分和靶点

通过UHPLC-MS鉴定出346种成分，结合GeneCards、DisGeNET、PharmGKB 数据库，筛选出男性不育靶点4418个、VC靶点295个，最终获得64个交集靶点。经PPI分析得到28个枢纽靶点，构建“药物-成分-靶点-疾病”网络后，度值前10的成分为14-去氧穿心莲内酯、芹菜素、蓟黄素、山柰酚、黄柏酸、弯孢霉菌素、柠檬苦素、羟基阿魏酸、美迪紫檀素、香叶木素。（如图1）

图1 脉络舒通丸对抗精索静脉曲张相关男性不育的网络分析

2. 枢纽靶点的GO和KEGG富集分析

GO富集分析显示，1485个显著结果涵盖1422个生物学过程（如细胞对化学应激/氧化应激的反应、凋亡信号通路调控）、17个细胞组分（如膜筏、膜微区）、46个分子功能（如转录共激活因子结合、核受体活性）。KEGG富集分析得到120条通路，前10条高显著性通路包括HIF-1、IL-17、TNF、PI3K/Akt、mTOR信号通路等。根据p值筛选出生物学过程、细胞组分、分子功能和KEGG信号通路各类别中的前10个条目，并在图2的环形图中绘制。

图 2 枢纽靶点的富集分析 

3. 脉络舒通丸减轻睾丸和附睾组织损伤

动物实验中，VC模型大鼠睾丸指数下降，生精小管结构破坏、精子数量减少，附睾管腔萎缩。脉络舒通丸干预后，随剂量升高，睾丸指数改善，生精小管及附睾结构逐步恢复，中、高剂量组接近正常，生精小管管腔数量及精子数量回升，证实其可修复VC诱导的组织损伤，且呈剂量依赖性。

图3 VC大鼠模型制备及睾丸组织和附睾的组织病理学变化

4. 脉络舒通丸减轻精索静脉曲张诱导的氧化应激

模型组睾丸组织中ROS、MDA（氧化产物）水平显著升高，SOD、GSH、GSH-Px、CAT（抗氧化酶）活性显著降低。脉络舒通丸干预后，氧化产物水平随剂量升高而降低，抗氧化酶活性升高，高剂量组效果最显著，表明其通过提升抗氧化能力、降低氧化损伤发挥作用。

图4 脉络舒通丸治疗对VC诱导的大鼠睾丸氧化应激生物标志物的影响

5. 脉络舒通丸减轻精索静脉曲张诱导的细胞凋亡

TUNEL染色显示，模型组睾丸凋亡细胞（TUNEL阳性）显著增多，脉络舒通丸干预后数量减少。同时，脉络舒通丸下调促凋亡蛋白BAX的表达，上调抗凋亡蛋白BCL2的表达，通过调节BAX/BCL2平衡抑制VC诱导的细胞凋亡。（如图5）

图5 脉络舒通丸对VC诱导的大鼠睾丸细胞凋亡的影响

6. 脉络舒通丸核心成分与潜在靶点的亲和力

分子对接实验显示，山柰酚、芹菜素、蓟黄素与PIK3CA，黄柏酸、柠檬苦素与AKT1，山柰酚与MTOR均具有强亲和力，这些成分可靶向PI3K/Akt/ mTOR通路核心蛋白。

图 6 核心成分与潜在靶点的分子对接结果

7. 脉络舒通丸通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路减轻睾丸损伤

如图7所示，Western blots分析表明，模型组大鼠睾丸中PI3K/Akt/mTOR 通路相关磷酸化蛋白（p-PI3K、p-AKT、p-mTOR）及HIF1α表达显著升高；脉络舒通丸干预后，上述蛋白表达降低，证实其可抑制该通路激活并减少HIF1α表达。

图7 PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达的Western blots分析结果

作者：刘　娟 姜艳玲

主编：程国良